Columbia Agar (Base) (Merck 1.00214)
EP ve ISO yönergelerine uygundur. In vitro (canlı hücre dışında) yapılan standart mikrobiyolojik analizlerde özelikle kanlı agar besiyeri hazırlamak için kullanılır.
Columbia Agar güvenlik sertifikası için burayı tıklayın .
Bileşim
Nutrient substrate 23,0 g/L; Starch 1,0 g/L; NaCl 5,0 g/L; Agar-agar 13,0 g/L
Hazırlanması
Dehidre besiyeri 42,0 g/L olacak şekilde damıtık su içinde eritilir ve otoklavda 121 oC'da 15 dakika sterilize edilir. Kan ve diğer katkılar bazal besiyeri 45-50 oC'a soğuduğunda ilave edilir. Hazırlanmış besiyeri berrak ve sarımsı kahverengi olup, 25 °C'da pH'sı 7,3±0,2'dir.
Kan ilave edildikten sonra parlak kırmızı ve non-hemolitikdir. Selektif izolasyon için selektif katkılar ilave edilerek kullanılabilir. Ayrıca zor gelişen Clostridium türlerinin izolasyonu için kullanılan Lactose Milk Egg-yolk agar, Gardnerella vaginalis 'in geliştirilmesi için Vaginalis Agar, Listeria 'nın selektif geliştirilmesi için de Acriflavin-Ceftacidim Agar yapımında bazal besiyeri olarak kullanılır. Clostridium difficile 'ın izolasyonu için de Columbia Agara kan, sikloserin ve sefoksidin ilavesi önerilmiştir.
Kanlı Agar hazırlanması: Sterilize edilip otoklav sonrası 45-50 oC'a soğutulmuş 95 mL bazal besiyerine 5 mL kan ilave edilip, karıştırılır ve steril Petri kutularına 12,5'er mL dökülür.
Gentamisin Kanlı Agar hazırlanması: Sterilize edilip otoklav sonrası 45-50 oC'a soğutulmuş 900 mL bazal besiyerine 100 mL defibrine koyun kanı ve 0,11 mL gentamisin çözeltisi ilave edilip, karıştırılır ve steril Petri kutularına 12,5'er mL dökülür.
Kaynamış Kanlı Agar hazırlanması: Sterilize edilip otoklav sonrası 45-50 oC'a soğutulmuş 90 mL bazal besiyerine 10 mL kan ilave edilip, karıştırılır. Karışım su banyosunda besiyerinin çikolata-kahverengine gelinceye kadar yaklaşık 10 dakika 80 oC 'da karıştırılarak ısıtılır ve steril Petri kutularına 12,5'er mL dökülür.
Laktoz Milk Egg-yolk Agar hazırlanması: 42,0 g Colombia Agar dehidre besiyeri, 12 g laktoz ve 1 g Agar-agar 1 litre damıtık suda ısıtılarak eritilir. 33 mL/L % 0,1 sulu neutral red çözeltisi eklenir. pH 7,0'a ayarlanıp 121 oC 'de 15 dakika otoklavlanır. 45-50 oC 'ye soğutulup, litreye 35 mL egg-yolk çözeltisi ve 10 g yağsız süttozu eklenir. Karıştırılıp, Petri kutularına dökülür.
Dehidre besiyerinin depolanması
15-25 oC'da ve besiyeri kutusu sıkıca kapalı tutulmak üzere, kutu açılmış olsa dahi son kullanma tarihine kadar güvenle kullanılabilir.
1 kutu ile hazırlanacak besiyeri miktarı
500 g olan 1 kutu dehidre besiyerinden, 11,9 L bazal besiyeri hazırlanır.
Kalite Kontrol (Spiral plater yöntemi)
Test Mikroorganizmalar | Ekim | Geli | Hemoliz | Bacitrain |
(kob/mL) | Kans | Kanl |
|
Escherichia coli ATCC 25922 | 103-105 | ≥ 70 | ≥ 70 |
|
|
Staphylococcus aureus ATCC 25923 | 103-105 | ≥ 70 | ≥ 70 | β | - |
Streptococcus pyogenes ATCC 12344 | 103-105 | ≥ 70 | ≥ 70 | β | + |
Streptococcus pyogenes ATCC 21059 | 103-105 | ≥ 70 | ≥ 70 | β | + |
Streptococcus pneumoniae ATCC 6301 | 103-105 | ≥ 70 | ≥ 70 | α | - |
Enterococcus faecalis ATCC 19433 | 103-105 | ≥ 70 | ≥ 70 | - | - |
Bacillus cereus ATCC 11778 | 103-105 | ≥ 70 | ≥ 70 | β |
|
Ürün Bilgileri
Ürün Adı | Merck Kat. No | Ambalaj |
Columbia Agar (Base) | 1.10455.0500 | 500 g |
Columbia Agar (Base) | 1.10455.5000 | 5 kg |
Agar-agar purified | 1.01614.1000 | 1 kg |
Egg-yolk emulsion sterile | 1.03784.0001 | 10 x 100 mL |
Gentamicin solution | 1.11977.0001 | 10 mL |
Lactose monohydrate | 1.07657.1000 | 1 kg |
Neutralred indicator | 1.01369.0025 | 25 g |
Skim milk powder |
|
|
Defibrinated blood |
|
|
Kaynaklar
Al-Jumaili, I.J., a. Bint, A.J.: Simple method of isolation and presumptive identification of Clostridium difficile. - Zbl. Bakt., I. Abt. Orig. A, 250; 152-146 (1981).
Bannermann, E.S., a. Bille, J.: A new selective medium for isolating Listeria spp. from heavily contaminated material. - Appl. Environ. Microbiol., 43; 165-167 (1988).
Black, W.A., a. Van Buskirk, F.: Gentamicin blood agar used as a general-purpose selective medium. - Appl. Microbiol., 25; 905-907 (1973).
ElEK, S.D.: The plate virulence test for diphtheria. - J. Clin. Pathol., 3; 250-258 (1949).
Ellner, P.D., Stoessel, C.I., Drakeford, E., a. Vasi, .:A new culture medium for medical bacteriology. - Amer. J. Clin. Path., 29; 181-183 (1958).
Greenwood, J.R., Pickett, M.J., Martin, W.J., a. Mack, E.G.: Haemophilus vaginalis (Corynebacterium vaginale): method for isolation and rapid biochemical identification. - Health Lab. Sci., 14; 102-106 (1977).
Hermann, G.J., Moore, M.S., a. Parsons, E.J.: A substitute for serum in the diphtheria in vitro toxigenicity test. - Amer. J. Clin. Path., 29; 181-183 (1958).
Hunt, D.E., Jones, J.V., a. Dowell, V.R.: Selective medium for the isolation of Bacteroides gingivalis. - J. Clin. Microbiol., 23; 441-445 (1986).
Karmali, M.A., Simor, A.E., Roscoe, M., Fleming, P.C., Smith, S.S., a. Lane, J.: Evaluation of a blood-free, charcoal-based selective medium for the isolation of Campylobacter organisms from feces. - J. Clin. Microbiol., 23; 456-459 (1986).
Kunze, M.: COLUMBIA-Agar-Grundsubstrat als Nährmedium für Mykoplasmen. - Zbl. Bakt. I. Abt. Orig., 216; 271-272 (1971).
Petts, D.: Colistin-oxolinic acid-blood agar: a new selective medium for streptococci. - J. Clin. Microbiol., 19; 4-7 (1984).
Thompson, J.S.: Colistin-oxolinic acid blood agar: a selective medium for the isolation of Gardnerella vaginalis. - J. Clin. Microbiol., 21;843 (1985).
Zaadhof, K.J., u. Terplan, G.: Zur Diagnose von Galtstreptokokken im TKT-Medium und CAMP-Test unter Verwendung des Columbia-Agar-Substrats. - Arch. Lebensmittelhyg., 22; 114-115 (1971).